在設定PCR program的時候會需要參考PRIMER的Tm值, 不過最近有時候再找一些commercial的primer時, 發現他們建議PCR program溫度設定的比Tm高很多,高出10幾度, 不 ... ... <看更多>
primer tm計算 在 [求救] PCR突然做不出來 的推薦與評價
能在72度工作的primer是否Tm值或者GC%較高呢? 15 F →huuban: 為什麼你65度要6分鐘. ... 17 F →WinnieDad: 可能誤以vector大小5.7kbp計算extension的時間吧? 01/20 13:28. ... <看更多>
primer tm計算 在 Re: [問題] PCR, Tm值差很多的primer - 看板Biotech - 批踢踢 ... 的推薦與評價
※ 引述《Porkcan (Threatening)》之銘言:
有種PCR方法是分開做
先用一條Primer做出單股
再加入另一條Primer繼續跑另一組Cycle
做出另外一股
這樣就可以設定個別最佳的Tm囉
不然就把Tm低的primer序列延伸
看能不能多弄幾個GC
: 手上有一組primer
: annealing temperature最佳是60度啦
: 不過有試過到40度也可以做的出來
: 我想要拿其中的Forward或是Reverse primer來跟oligo d(T)配成一對進行PCR
: 但是Oligo d(T)的溫度似乎很低 25度?
這樣在Elongation的溫度下
Oligo d(T)不會飛走嗎? @@"
: 不知道這樣兩個primer之間的Tm值相差這麼多
: PCR要怎麼去調整
: ps有做過gradient PCR, 大概從35~45度, 不過沒有product
: 還是就直接把Tm降到25度配合oligo d(T)勒?
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◆ From: 140.114.98.128
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